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    決定PCR反應特異性主要因素
  • 發布日期:2025-04-07      瀏覽次數:150
    •   PCR(聚合酶鏈式反應)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。
       
        PCR反應特異性主要決定因素:
       
        1、引物。引物的結構和長度是PCR特異性的關鍵。此外,引物濃度過高會增大形成引物二聚體的概率,從而降低PCR特異性。
       
        2、復性溫度。在Tm值允許范圍內,選擇較高的復性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結合,提高PCR反應的特異性。
       
        3、延伸時間。延伸時間過長會導致非特異性擴增帶的出現。
       
        4、Mg2+濃度。Mg2+濃度對PCR擴增的特異性有顯著影響。Mg2+濃度過高時,容易出現非特異性擴增,使反應特異性降低。
       
        5、DNA聚合酶的種類和數量。不同種類的酶對PCR特異性的影響程度不同;酶的量過多更容易引起非特異性擴增。
       
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